10×Genomic单细胞免疫组库测序是建立在GemCode技术上的微流体平台，将带有条形码和引物的凝胶珠与单个细胞包裹在油滴中；接下来在每个油滴内，凝胶珠溶解，细胞裂解释放mRNA，通过逆转录产生用于测序的带条形码的cDNA。液体油层破坏后，cDNA一分为二，后续同时进行基因表达和免疫组库文库构建；其中TCR或者BCR的V(D)J序列通过设计在TCR或者BCR的C区域的巢式PCR引物进行富集。然后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测，即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据，实现在单细胞水平同时对基因表达和免疫组库进行研究。
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图1 | V(D)J重组产生TCR/BCR多样性
● 测序数据质量控制;
● Clonotype分型。
● 比对与注释：样本基本信息结果统计，样本contig注释信息结果统计，样本Consensus序列注释信息结果统计
● 特征分析：CDR3特征分析，V/J基因特征分析，V-J Paired特征分析
● 多样本分析：样本间Clonotype比较，Overlapping Clonotype聚类分析，Overlapping Clonotype差异分析
● 1、可实现成对的重链和轻链（B细胞）或α和β链（T细胞）的全长测序;
● 2、精确到单细胞水平，能获得大量单细胞的免疫组数据。
● 3、大规模单细胞VDJ+表达谱测序，单个细胞成本大大降低
● 样品类型：新鲜人或小鼠细胞悬液、血液（全血、PBMC等）；
● 细胞来源：血液提取、磁珠富集、流式分选、组织解离；
● 细胞大小：小于40μm ；
● 细胞总量：细胞悬液，一个样本细胞起始量约2.0x105 个。
● 质量要求：细胞活性大于85%，理想浓度约为1000个/ul
● 细胞培养基及缓冲液不能含有Ca2+ 和 Mg2+ 等影响酶活性的物质。
● 免疫组库在肿瘤方面的应用。
● 免疫组库在移植和免疫重建上的应用
● 免疫组库在自身免疫性疾病方面的应用。
● 免疫组库在其他方面的应用。
