单细胞联合组学








转录组和表观基因组的多组学分析可以改变人们对生物学的理解,该技术可以在同一细胞中获得基因表达和ATAC(染色质可及性)的信息,帮助研究者提高发现不同细胞类型或状态的机会,并进一步揭示基因调控机制。将调控元件的发现与基因表达相结合,探索驱动细胞分化、发育和疾病的基因调控相互作用。




技术原理图





实验项目流程


步骤1、样品准备


从细胞培养物、原代细胞、新鲜或冷冻组织中分离出的细胞核悬浮液开始。





步骤2、构建10X测序文库


使用10X公司的配套试剂盒和单细胞分选平台构建单细胞基因表达和ATAC测序cDNA文库,首先将单细胞核混合在一起,然后使用10X单细胞分选仪对单细胞核制备凝胶珠封装。mRNA和转置的DNA片段都用10x条形码标记,每个条形码序列代表同一个独特的细胞。





步骤3、文库测序


由此产生的10x条形码单细胞基因表达和ATAC-seq库与Illumina测序仪上的标准NGS短读测序兼容,可大规模并行分析数千个单个细胞。





步骤4、数据分析


10X公司的Cell Ranger ARC分析软件为每个细胞生成开放染色质和基因表达谱,识别具有类似谱的细胞群,并计算开放染色质峰和基因表达之间的联系。





步骤5、数据可视化


使用Loupe Browser可视化软件交互式探索实验结果,比较不同细胞类型和状态的染色质开放性和基因表达,并研究染色质开放峰和基因表达之间联系的生物学意义。





步骤6、个性化分析


我们元信生物为各位科研工作者提供基于单细胞转录组和单细胞ATAC数据的各种高级的个性化分析。





样本要求


● 样本类型——制备好的细胞悬液


● 细胞活性——活细胞率在85%以上


● 细胞大小——小于40μm


● 细胞数——大于2x105


● 细胞培养液及缓冲液不能含有Ca2+   和  Mg2+    等影响酶活性的物质。





应用领域




分析结果展示




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