转录组和表观基因组的多组学分析可以改变人们对生物学的理解,该技术可以在同一细胞中获得基因表达和ATAC(染色质可及性)的信息,帮助研究者提高发现不同细胞类型或状态的机会,并进一步揭示基因调控机制。将调控元件的发现与基因表达相结合,探索驱动细胞分化、发育和疾病的基因调控相互作用。
步骤1、样品准备
从细胞培养物、原代细胞、新鲜或冷冻组织中分离出的细胞核悬浮液开始。
步骤2、构建10X测序文库
使用10X公司的配套试剂盒和单细胞分选平台构建单细胞基因表达和ATAC测序cDNA文库,首先将单细胞核混合在一起,然后使用10X单细胞分选仪对单细胞核制备凝胶珠封装。mRNA和转置的DNA片段都用10x条形码标记,每个条形码序列代表同一个独特的细胞。
步骤3、文库测序
由此产生的10x条形码单细胞基因表达和ATAC-seq库与Illumina测序仪上的标准NGS短读测序兼容,可大规模并行分析数千个单个细胞。
步骤4、数据分析
10X公司的Cell Ranger ARC分析软件为每个细胞生成开放染色质和基因表达谱,识别具有类似谱的细胞群,并计算开放染色质峰和基因表达之间的联系。
步骤5、数据可视化
使用Loupe Browser可视化软件交互式探索实验结果,比较不同细胞类型和状态的染色质开放性和基因表达,并研究染色质开放峰和基因表达之间联系的生物学意义。
步骤6、个性化分析
我们元信生物为各位科研工作者提供基于单细胞转录组和单细胞ATAC数据的各种高级的个性化分析。
● 样本类型——制备好的细胞悬液
● 细胞活性——活细胞率在85%以上
● 细胞大小——小于40μm
● 细胞数——大于2x105
● 细胞培养液及缓冲液不能含有Ca2+ 和 Mg2+ 等影响酶活性的物质。